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上海研域生物原代細胞凍存和復蘇?檢測方法包括以下步驟
發(fā)布時間： 2024-05-28 點擊次數(shù)： 1655次我們知道，在原代細胞培養(yǎng)檢測實驗在實驗儀器等工作上都要耗費不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了原代細胞保存這個實驗步驟，將暫時多出來的原代細胞冰凍保存，保存細胞活力。
原代細胞復蘇是一個簡單的試驗操作，但操作中也有許多需要注意的事項，在實驗操作中注意細小的問題，才能使復蘇后的細胞保持良好的狀態(tài)，針對原代細胞復蘇應該注意以下幾點：
1. 可以提前把需要的體積的培養(yǎng)液放到培養(yǎng)瓶里，擰松瓶蓋，放到孵箱里30分鐘--1個小時；
2. 為防止凍存管在升溫時出現(xiàn)爆裂等情況，可以在放入水浴前就把超凈臺里的蓋子擰松一下然后再擰上；
3. 水浴溫度37℃左右。
一、慢凍程序1. 標準程序：采用細胞凍存器
當溫度在-25 ℃以上時，1~2 ℃/min；
當溫度達-25 ℃以下時，5~10 ℃/min；
當溫度達-100℃時，可迅速放入液氮中。
2. 簡易程序：將冷凍管（管口要朝上）放入紗布袋內，紗布袋系以線繩，通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口，按每分鐘溫度下降1~2 ℃的速度，在40 min內降至液氮表面過夜，次日早晨投人液氮中。
3. 傳統(tǒng)程序：冷凍管置于4℃ 10 分鐘→ -20℃ 30 分鐘→ -80℃ 16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽長期儲存。
二、低溫保護劑的應用
在細胞凍存時加入溫保護劑，能大大提高凍存效果。
常用的低溫保護劑是DMSO，它是一種滲透性保護劑，可迅速透入細胞，提高胞膜對水的通透性，降低冰點，延緩凍結過程，能使細胞內水分在凍結前透出細胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內冰晶，從而減少冰晶對細胞的損傷。
三、保存細胞的復蘇方法
1. 快速解凍
凍存細胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1 分鐘內全部融化（不要超過3 分鐘）。
2. 解凍后的細胞可直接接種到生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng)，24小時后再用新鮮培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。
3. 如果細胞對冷凍保護劑特別敏感
解凍后的原代細胞應先通過離心去除冷凍保護劑，然后再接種到生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。
上海研域生物應保證清潔，整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸，并可以使實驗中用到的“花板"降至限度。從而提高檢測的特異性，并得到更準確、可靠的實驗結果。
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